ワールドクオリティバイオテク株式会社

コア技術プラットフォーム
　当社のパートナーが開発したCAMouse®は、マウスのB細胞の正常な発達を保証し、完全ヒトIgGを直接発現させる現在世界で唯一の完全ヒト抗体マウスです。
CAMouse® 完全ヒト抗体搭載マウス系統の特徴：

＊ヒト免疫グロブリン重鎖およびκ・λ軽鎖遺伝子を導入され、同時にマウスにおける内因性の重鎖および軽鎖遺伝子を不活性化 ＊32のVH、22のVκ、16のVλを含む70のヒト免疫グロブリンV領域が導入され、再配列の多様性が豊富 ＊ヒト／マウス免疫グロブリン時間切替発現特性を有し、マウスB細胞の正常な発達を保証するために、B細胞発達の初期段階でマウスIgM BCR構造を形成し、B細胞から形質細胞への発達段階でタイプ切替を経て全ヒトIgGを直接産生

CAMouse® テクノロジーの優位性：
＊超大型遺伝子（>500kb）の効率的なトランスジェニック技術の確立：

細胞表面修飾により、従来の酵母プロトプラストと胚性幹細胞をベースに、ポリドパミンを用いて酵母プロトプラストと胚性幹細胞の表面にそれぞれアビジンとビオチンを仲介し、酵母プロトプラストと胚性幹細胞の効率的な融合技術を確立し、超大型断片（>500kb）の導入効率を大幅に向上させ、超大型遺伝子を効率的に導入する技術を確立し、ヒトIgG、IgκおよびIgλのトランスフェクションにおいて、CAMouse®のコア特許技術を提供できます。

＊宿主動物のB細胞発生を時空間的に発現制御する特許技術を確立し、完全ヒトIgGを一度に生産

移入されたヒト免疫グロブリン遺伝子は、宿主動物自身のIgα/Igβとうまく結合してBCR構造を形成することができず、宿主動物のB細胞発生に影響を与えるという課題に対応するため、移入されたヒトIgHのC領域を遺伝学的に修飾し、制御配列を改変し、Pre-B細胞ステージにおいて、ヒトV(D)J配列とマウスIgCµ配列からなるヒト/マウスキメラIgMを形成し、IgMと抗原との結合後、マウスIgCµがマウスIgα/Igβと結合して機能的BCRを形成し、正常なBCRシグナル伝達とB細胞発生を行います。形質細胞の段階において、CAMouse®はトランスジェニックベクター中のS変換配列とヒトIg Cγ配列を用いてクラススイッチングを行い、全ヒトIgGを発現します。

＊CAMouse®を用いた完全ヒトモノクローナル抗体医薬品の早期発現プラットフォームの確立

4週間の高効率・迅速動物免疫技術、2週間のハイスループット・ハイブリドーマ・スクリーニング技術、ハイスループット抗体親和性検出技術を統合した完全ヒトモノクローナル抗体医薬品の早期発現プラットフォームを確立し、短期間で親和性の高い完全ヒトモノクローナル抗体をスクリーニングすることができます。

応用事例
応用事例１：テストプロジェクトーPD-L1抗体
目的：CAMouse®マウスの免疫特性及び高親和力抗体のスクリーニング能力を評価
方法：ロシュ社から市販されているPD-L1モノクローナル抗体医薬品であるテセントリクをベンチマーク抗体として用い、CAMouse®マウスにPD-L1標的抗原を免疫し、迅速ハイブリドーマスクリーニングプラットフォームにより抗PD-L1特異的完全ヒトモノクローナル抗体を取得し、候補モノクローナル抗体のEC50、IC50、親和性などの機能を解析しました。
結果：CAMouse®マウスから得られた候補モノクローナル抗体は、Tecentriqと比較してEC50、IC50、親和性が優れており、CAMouse®マウスの優れた全ヒトモノクローナル抗体探索能力が実証されました。
＊CAMouse®は良好な免疫反応を示し、特異性の高い完全ヒト抗体を大量に産生



＊CAMouse®は特異性と親和性が高い完全ヒト抗体を大量に産生（FACS, EC50, IC50

＊CAMouse®抗体のCDR領域に変異率が高い


応用事例2：コロナウイルス治療用新規完全ヒト抗体の開発
目的：新型コロナウイルス棘状糖タンパク質の受容体結合ドメイン（RBD）は、ウイルスと宿主細胞のACE2受容体との結合を仲介する重要な部位であり、中和抗体の重要な標的です。 従って、新型コロナウイルスRBDタンパク質を標的とする、広域ウイルス中和モノクローナル抗体医薬品の迅速かつ効率的な開発は、世界中で発生する新型コロナの予防と制御のための重要な方向性となります。
方法：CAMouse®マウスに新型コロナウイルスRBDタンパク質を免疫し、ハイブリドーマ電気融合および半固体培養スクリーニングプラットフォームにより抗新型コロナウイルス特異的完全ヒトモノクローナル抗体を取得しました。候補モノクローナル抗体について、シュードウイルス、生ウイルスおよび抗原エピトープ解析を行い、RBDタンパク質の異なるエピトープを認識するモノクローナル抗体の組み合わせをスクリーニングし、in-vitroおよびin-vivo評価を行い、最終的に治療効果が期待できる抗新型コロナウイルス完全ヒトモノクローナル抗体のカクテル組み合わせ物を取得しました。
結果：生ウイルスに対する中和活性が高く、RBDタンパク質の異なるエピトープを認識する2種類のモノクローナル抗体候補をスクリーニングし、2種類のモノクローナル抗体を組み合わせしました。モノクローナル抗体の組み合わせは、in vitroでは細胞レベルで新型コロナウイルスを効果的に中和できることが確認され、in vivoの防御アッセイでは、カニクイザルの鼻、咽頭、肛門ぬぐい液、肺の感染組織におけるウイルス量を有意に減少させることができました。
＊候補モノクローナル抗体ウイルス中和活性（IC50）とKDアッセイ


＊カニクイザルの新型コロナウイルス感染：モノクローナル抗体併用による予防効果

参考文献：https://doi.org/10.3389/fimmu.2022.992787

応用事例3：GPC3/CD3に対する完全ヒト型二重特異性抗体の開発
背景：GPC3タンパク質は肝臓がん治療の新たなターゲットとして期待されています。GPC3を標的とするCAR-T細胞、ワクチン、二重特異性抗体が前臨床および臨床段階で評価されています。従って、T細胞とがん細胞を同時に結合させる二重特異性抗体分子の設計は、リンパ球性悪性腫瘍や固形腫瘍の治療において重要な進展方向となっています。
方法：ヒトGPC3ペプチドを用いてCAMouse®マウスを免疫し、ハイブリドーマ電気融合および半固体培養スクリーニング技術プラットフォームにより抗GPC3特異的完全ヒトモノクローナル抗体を得ました。一方、GPC3/CD3二重特異的抗体を構築し、in vivoおよびin vitroで評価し、最終的に臨床応用価値のあるGPC3/CD3二重特異的完全ヒトモノクローナル抗体医薬品をスクリーニングし、獲得しました。
結果：5株の抗GPC3特異的完全ヒトモノクローナル抗体を獲得し、1株のGPC3モノクローナル抗体をピックアップし、GPC3/CD3二重特異性抗体を構築しました。in vitro評価おいて、二重特異性抗体はGPC3依存性腫瘍細胞に対して良好な殺傷効果を示し、in vivo評価では、異種移植腫瘍の増殖を効果的に抑制することが確認されました。
＊CAMouse®マウスを用いた5回免疫後の血清ELISA力価の評価


＊GPC3モノクローナル抗体の結合活性と親和性解析


＊GPC3/CD3二重特異性抗体はT細胞を活性化し、GPC3依存性の腫瘍細胞殺傷効果を媒介


＊GPC3/CD3二重特異性抗体による異種移植腫瘍増殖抑制効果

参考文献：
1: https://doi.org/10.1007/s10637-020-01033-x；
2: https://doi.org/10.1080/15384047.2020.1743158

完全ヒト抗体開発サービスプロセス

ハイスループット・ハイブリドーマ・スクリーニング・プラットフォーム


シングルB細胞抗体探索プラットフォーム


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