日本精化株式会社

日本精化リピット事業では、自社製造の豊富な高純度リン脂質シリーズを用いて、多くのリポソームへの薬物封入を経験しています。
また、Presomeシリーズもご用意しており、お客様のニーズに合わせたサービスのご提供が可能です。

♦脂質および薬物濃度市販リポソーム医薬品DOXIL®との比較

脂質およびドキソルビシン濃度をHPLCにより定量しました。

Components	Interview Form of DOXIL®	Assay Values	% of Total Lipid
HSPC	9.58 mg/mL	9.74 mg/mL	59.6%
Cholesterol	3.19 mg/mL	3.27 mg/mL	20.0%
MPEG2000-DSPE	3.19 mg/mL	3.33 mg/mL	20.4%
ドキソルビシン	2.00 mg/mL	2.00 mg/mL	-

♦脂質と薬物の濃度比

• Interview Form of DOXIL®: 0.125
• DOXIL® from Presome ACD-1: 0.122

♦薬物封入率

ドキソルビシンの封入率を測定するために、得られたリポソームを超遠心しリポソーム画分を回収後、HPLCによりドキソルビシン濃度を定量しリポソームに封入されたドキソルビシン濃度を測定しました。

The percentage of encapsulated Doxorubicin in DOXIL® from Presome ACD-1: 100%

粒子径分布及びゼータ電位

得られたリポソーム液の平均粒子径、多分散指数（PDI）、ゼータ電位をMalvern Nano-ZSを用いた動的散乱光分析により測定しました。

♦粒子径分布 平均粒子径: 100.9± 0.9 nm PDI: 0.048± 0.004 ♦ゼータ電位 -27.1± 0.7 mV（9% sucrose）

水和層の厚さ測定

In ζ-potential対Debye-Huckelパラメータプロット1)の近似曲線の傾きから、得られたリポソーム表面の水和層の厚さを測定しました。

The thickness of the fixed aqueous layer of DOXIL® from Presome ACD-1 : 2.1 nm

1) K. Shimada, A. Miyagishima, Y. Sadzuka, Y. Nozawa, Y. Mochizuki, H. Ohshima and S. Hirota, Determination of the thickness of the fixed aqueous layer around polyethyleneglycol-coated liposomes. Journal of Drug Targeting, 1995, 3, 283

TEM画像

Negative staining: The samples were let to absorbed 400 mesh carbon coated grid and were put into 2% phospho tungstic acid solution (㏗7.0) for a few seconds.

Observation and imaging: The samples were observed by a transmission electron microscope (JEM-1200EX; JEOL Ltd.,) at an acceleration voltage of 80 kV. Digital images (2048x2048 pixels) were taken with a CCD camera (VELETA, Olympus Soft Imaging Solutions GmbH).

市販リポソーム医薬品DOXIL®との比較 まとめ

以上のように、Presomeを用いて単一膜リポソームを調製することができました。また、リポソーム内水層にほとんどの薬物を保持し、脂質・薬物組成、平均粒子径、粒子分布、水和層の厚さはDOXIL®と同等であることが示されました。
これらのことより、

Presomeを用いた場合でもDOXIL®と同等のリポソーム医薬品が製造できると考えられます。

リポソーム化デザインの流れ

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　※必要に応じ、2～4は、繰り返し対応いたします。

サポート体制

日本精化リピット事業では、自社製造の豊富な高純度リン脂質シリーズを用いて、多くのリポソームへの薬物封入を経験しています。
また、Presomeシリーズもご用意しており、お客様のニーズに合わせたサービスのご提供が可能です。

リポソーム液の商業製造検討（※1）

• 高価なリン脂質が多種多量に必要。※試薬メーカーでのDSPC 1gで66,200円
• 粒子径制御にはExtruder（整粒装置）が必要
• リポソーム液調製が不完全であれば本来の効果・結果が得られない。
• フラスコ（Bangham法）でのリポソーム液調製は商業製造スケールアップが困難

リポソーム製造装置

少～中量スケールまで対応できる様々なリポソーム製造装置を所有しておりますので、お客様のリポソーム開発に対する多様なご要望にお応えいたします。 

エクストルーダー（ϕ90㎜）	エクストルーダー（ϕ142㎜）	ラボスケール凍結乾燥機
精密分散・乳化機	インラインミキサー	限外ろ過機